供应高效液相色谱法测定霉酚酸血药浓度

产品品牌：赛智

产品型号：LC-10T液相色谱仪

高效液相色谱法测定霉酚酸血药浓度

陈培鹏1,曾摇 颖2

(1. 广东省卫生医疗对外合作服务中心,广东 广州 510060; 2. 广东省人民医院 药学部,广东 广州 510080)

摘要:目的 建立高效液相色谱法测定人血浆中霉酚酸药物浓度。 方法 色谱柱为 Kromasil C18(5 滋m,4. 6 mm 伊 250 mm) ;流动相为乙腈 ― 10 mmol / L 磷酸二氢钾溶液(pH = 5. 0) (体积比 40 颐 60) ;柱温 25 益 ;流速 1. 5 mL / min;检测波长为 218 nm。  结果 本测定方法的线 性范围:0. 1 - 50 滋g / mL,r = 0. 9997。 平均回收率为(97. 8 依 4. 6 ) % ,日内 RSD臆6. 4% ,日间 RSD臆8. 1% 。  霉酚酸的最低检测浓度为 0.05 滋g / mL。 结论 本方法简单、灵敏、重现性好,适用于临床血药浓度监测,以及人体药代动力学的研究。 关键词:霉酚酸;血药浓度;高效液相色谱法

中图分类号:R 969. 1摇  文献标识码:A摇  文章编号:1006 - 8783(2005)05 - 0574 - 02  霉酚酸酯 ( Mycophenolate mofetil,MMF) 是一种新

2.3摇  色谱条件摇  色谱柱为 Kromasil C18 (5 滋m,4. 6 mm型抗代谢类免疫抑制药,临床上用于预防和治疗心、伊 250 mm) ;流动相为乙腈― 10 mmol / L 磷酸二氢钾溶肝、肾移植的排异反应。 MMF 口服吸收迅速,给药后液(pH = 5. 0) ( 体积比 40 颐 60 ) ;柱温 25 益 ;流速 1. 5在血浆酯酶的作用下水解成游离的活性代谢物霉酚酸mL / min;检测波长为 218 nm。  血浆中内源性杂质均不(mycophenolic acid,MPA) 。 MPA 是高效、选择性、非竞影响 MPA 和内标物的分离测定,MPA、双氯芬酸保留争性、可逆性的次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂,可抑时间分别为 5. 20 min 和 7. 82 min,见图 1。
制鸟嘌呤核苷酸的经典合成途径。 MPA 在人体内药 代动力学个体差异较大,且同一个体移植术后不同时 

间药代动力学亦有较大差异,其血药浓度又与药效成 

函数关系,因此对 MPA 进行血药浓度监测对减少毒副 

作用,维持患者最佳免疫抑制水平很有必要[1 -3] 。  本

文建立了一种快速、准确的高效液相色谱法,用于临床

上 MPA 的血药浓度监测以及人体药代动力学研究。

1摇  仪器与试药

1.1摇  仪器摇  Waters 高效液相色谱系统( 600 HPLC 泵,

A 空白血浆;B 样品486 型紫 外 检 测 器, Millennium32  色 谱 工 作 站 ) , XW鄄

1 酶酚酸; 2 双氯芬酸80A 旋涡混合器(上海医科大学仪器厂) ,高速离心机

图 1摇  HPLC 色谱图 (美国雅培公司 TDx 仪附件) 。

Fig. 1摇  HPLC chromatograms

1.2 摇  试药摇  霉酚酸标准品 ( 美国 Roche 公司,批号: 2.4摇  血浆样品处理与测定摇  吸取血浆样品 200 滋L,加

CC99010002,纯度 98. 90% ) ,双氯芬酸(纯度 100郾 2% ) , 入装有 20 滋L 甲醇的 1. 5 mL 离心管,加入内标溶液 25

甲醇(色谱纯,Merck) ,其余试剂均为分析纯。

滋L,旋涡 30 s,加入甲醇 600 滋L,旋涡 1 min,10 000 r /

min 离心 5 min,取上清液 50 滋L 进样。  记录色谱图,以

2摇  方法与结果

样品峰面积 As 与内标峰面积 Ai 之比值 Y 代入标准曲

2.1摇  标准溶液配制摇  精密称取 MPA 标准品 20 mg 置于

线计算血药浓度。

10 mL 容量瓶中,用甲醇溶解并定容,得 2 mg / mL 的

2.5摇  标准曲线摇  吸取空白血浆 200 滋L 于 1. 5 mL 离

MPA 储备液。 将 MPA 储备液以甲醇稀释,配置浓度为

心管,分别加入不同浓度的 MPA 标准溶液 20 滋L,旋涡

1、2、5、10、20、50、100、250、500 滋g / mL 的 MPA 标准溶液。

30 s,使血药浓度分别为 0. 1、0. 2、0. 5、1、2、5、10、25、50

2.2摇  内标溶液配制摇  精密称取双氯芬酸对照品 10 mg

滋g / mL。  其余按 “ 2. 4 冶 项下方法操作,以不同浓度的

置于 100 mL 容量瓶中,用甲醇溶解并定容,得浓度为

MPA 系列溶液的 As 和 Ai 来计算 Y,以 Y 为 纵坐标,

100 滋g / mL 的内标溶液。

MPA 的质量浓度 籽 为横坐标进行线性回归,标准曲线

方程为:Y = 0. 258籽 + 0. 024 ( r = 0. 9997 ) 。  以信噪比

作者简介:陈培鹏( 1976 - ) ,男,大学本科,主要从事援外药

S / N = 3颐 1计,MPA 的最低检测浓度为 0. 05 滋g / mL。

品供应。

2.6摇  回收率试验摇  分别于 200 滋L 空白血浆中加入 2、

5

74

 

第 5 期摇  陈培鹏,等. 高效液相色谱法测定霉酚酸血药浓度 

50、500 滋g / mL 3 种浓度的 MPA 标准溶液 20 滋L,旋涡

内标分离良好,且无内源性杂质及合用药物干扰。

30 s,其余按“2. 4 冶 项下方法操作,以标准曲线方程计

3.2摇  本文采用甲醇直接沉淀蛋白的方法测定 MPA 血

算出 MPA 血药浓度,以测得值与加入值之比计算回收

药浓度,具有准确、简单、迅速的特点,20 名肾移植患

率。  高、中、 低 3  种 浓 度 的 平 均 回 收 率 为 ( 97郾 8 依

者 MPA 稳态浓度波动范围为 0. 23 ~ 46. 5 滋g / mL,位于

4郾 6) % ,结果见表 1。

标准曲线范围内,说明本文建立的方法切实可行,可用

2.7摇  精密度试验摇  分别于 200 滋L 空白血浆中加入 2、

于临床脏器移植患者血浆中 MPA 的常规监测。

50、500 滋g / mL 3 种浓度的 MPA 标准溶液 20 滋L,旋涡

#$

30 s,其余按 2. 4 项方法操作,以一天内 5 次测得 MPA

%$

浓度来计算日内精密度,以一周内 5 次测定的 MPA 浓

度来计算日间精密度。  高、中、低 3 种浓度日内 RSD臆

&$

6.4% ,日间 RSD臆8. 1% ,结果见表 1。

'$

表 1摇  精密度及回收率

Tab. 1摇  Recovery and precision of MPA(n = 5)

$

$

)

(

'&

籽(血药浓度) /

籽(实测浓度) /

回收率 /

日内 RSD /

日间 RSD /

!!"

(滋g· mL - 1 )

(滋g· mL - 1 )

 

2.8摇  临床应用摇  20 名肾移植患者口服 MMF,每次 500

参考文献:

mg,每日 2 次,连续服用 7 d 达稳态后,于 1 次给药间

[1]康建,蒲菲菲,刘亚革,等. 固相萃取反相高效液相色谱法测

隔分别于 0、0. 5、1、1. 5、2、3、4、5、6、8、10、12 h 穿刺上

定人血浆麦考酚酸浓度 [ J] . 中国药学杂志,2001,36 ( 5 ) :

肢静脉抽取血样。 MPA 达峰时间 Tmax为 0. 5 - 1. 5 h,

331.

峰浓度 Cmax 为 ( 27. 8 依 15. 4 ) 滋g / mL, 谷 浓 度 Cmin 为

[2]宋洪杰,张黎明,胡晋红. 高效液相色谱法同时测定人血浆中

(1郾 1 依 0. 7) 滋g / mL。  平均药时曲线见图 2。

霉酚酸及其葡糖苷酸[J] . 第二军医大学学报,2002,23 ( 4 ) :

400.

3摇  讨 论

[3]Shipkova M, Niedmann PD, Armstrong VW,et al. Simultaneous

determination of mycophenolic acid and its glucuronide in human

3.1摇  MPA 的酚羟基及羧基等基团可与色谱柱中硅醇

plasma using a simple high鄄performance liquid chromatography

基发生相互作用,致使色谱峰拖尾,且峰型受 pH 值影

procedure[J] . Clinical chemistry,1998, 44(7) :1481.

响较大,本文发现缓冲液 pH5. 0 时 MPA 色谱峰较对

(收稿日期:2005 - 06 - 20;修回日期:2005 - 07 - 08

)

称。  乙腈鄄磷酸二氢钾溶液的比例为 40 颐 60 时,MPA 与

(上接第 573 页)

中有 4 例在用药期间出现尿素氮和肌酐升高,在这 4

3摇  讨 论

例中有 3 例的谷浓度大于 10 滋g·  mL -1 ,所以当谷浓

万古霉素是三环糖肽类抗生素,主要以原形从肾

度大于 10 滋g·  mL -1 ,峰浓度大于 40 滋g·  mL -1 时,应

小球滤过经近端肾小管重吸收和分泌而排泄,其血清

进行连续性的血药谷、峰浓度监测,实施个体化给药

半衰期与肾功能有关。  其不良反应主要为耳肾毒性,

方案。

早期产品由于纯度问题,耳肾毒性的发生率较高,严重

参考文献:

影响了它的临床应用。  近年由于工艺技术的提高,使

[1]Leader WG,chandler M,Castiglia M. Pharmacikinetics optimisa鄄

得万古霉素的纯度显著提高,不良反应也明显减轻[2] 。

tion of vancomycin therapy [ J] . Clin Pharmacokinet,1995,28:

老年人随着年龄的增长,肾小管滤过功能减退,体内药

327.

物的清除减慢。  老年人肾血流量仅为青年人的 40%

[2]赵子文,熊剑辉,钟维农,等. 进口万古霉素与国产去甲万古

霉素治疗耐甲氧西林金葡球菌下呼吸道感染的对比研究

~ 50% ,肾小球滤过率约下降 50% ,因此会影响肾脏对

[J] . 中国抗生素杂志,2003,28(4) :242.

万古霉素的清除,使其血浆浓度升高,易在体内产生蓄

[3]严震文,张月莉,陆文俊,等. 万古霉素对老年人肾功能的影

积,继而引起肾功能的损害[3] 。  因此临床应用时应根

响[J] . 中国临床药学杂志,2002,11(1) :12.

据患者的肾功能状态严格调整用药剂量和给药的间隔

[4]胡瑾瑜,施耀国,张菁,等. 万古霉素在健康老年人和年轻人

时间,同时应用时监测肾功能变化[4] ,如尿素氮和肌酐

的药代动力学[J] . 中国抗感染化疗杂志,2003,3(3) :215.

进行性升高,宜及时停药。  在监测的 46 例患者中,其

(收稿日期:2005 - 05 - 13)

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